細胞凍存液選擇指南 細胞凍存液的選擇對于細胞的長期保存至關重要。以下是一份詳細的細胞凍存液選擇指南： ### 一、選擇原則 1. **細胞存活率高**：確保細胞在凍存和溶解過程中的損傷減低到最小，以維持較高的細胞存活率。 2. **生物學特性無影響**：凍存細胞復溫后，其細胞生物學特性應無明顯影響。 3. **無毒副作用**：低溫保護劑容易去除，成分清楚，對細胞、人體無毒副作用。 4. **快速起效**：凍存保護劑應能快速起效，以減少操作步驟。 5. **性價比高**：在滿足以上條件的前提下，選擇性價比高的細胞凍存液。 ### 二、常規(guī)配方 1. **基礎培養(yǎng)基+DMSO**：常規(guī)細胞凍存液配方為基礎培養(yǎng)基（含10%胎牛血清）與DMSO按9:1配制。DMSO溶于培養(yǎng)基時會釋放大量熱量，因此細胞凍存液需提前配制，避免燙傷細胞。注意，不能直接在細胞培養(yǎng)液中添加DMSO。 2. **無血清細胞凍存液**：對于無血清培養(yǎng)的細胞，可以選擇商品化的無血清細胞凍存液。這些凍存液通常含有人血清白蛋白、DMSO、葡萄糖、復方電解質注射液、右旋糖苷或氨基酸等成分，能夠提高細胞存活率和活力，同時減少病毒、霉菌和支原體等的污染。 ### 三、替代成分選擇 若選擇不含DMSO的細胞凍存液，需確認替代成分的物質基礎。替代成分應具有良好的冷凍保護特性，且對細胞的潛在危害較小。同時，需進行支原體檢測，確保無細菌及細胞污染。 ### 四、注意事項 1. **細胞狀態(tài)**：選擇處于對數(shù)生長期、匯合度約80%\~90%的細胞進行凍存操作，確保細胞狀態(tài)最佳。 2. **凍存密度**：細胞凍存密度以1×10^6\~2×10^7 cells/mL為宜，可根據(jù)細胞特性進行調整。 3. **降溫過程**：遵循慢凍快融的原則，使用程序降溫盒或逐步降溫的方法將細胞放入-80℃冰箱過夜后，再轉移至液氮中長期保存。 4. **無菌操作**：在配制和使用細胞凍存液時，需嚴格遵守無菌操作規(guī)范，避免污染。 綜上所述，細胞凍存液的選擇應綜合考慮細胞存活率、生物學特性、毒副作用、起效速度和性價比等因素。在選擇時，可根據(jù)實驗需求和細胞特性進行靈活調整。同時，注意遵循正確的凍存操作步驟和注意事項，以確保細胞的長期保存效果。