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| 產(chǎn)地 | 美國 |
| 保存條件 | |
| 品牌 | BD |
| 貨號 | 565082 |
| 用途 | 細胞內(nèi)染色（流式細胞術(shù)）（常規(guī)測試） |
| 組織來源 | |
| 細胞形態(tài) | |
| 是否是腫瘤細胞 | |
| CAS編號 | |
| 保質(zhì)期 | |
| 器官來源 | |
| 免疫類型 | |
| 品系 | |
| 生長狀態(tài) | |
| 物種來源 | |
| 包裝規(guī)格 | 1mg/支 |
| 純度 | 99% |
| 是否進口 | 是 |
CFSE染料
提供的材料
CFSE染料（2瓶，每瓶500μg染料）
需要但未提供的材料
? 目標原代淋巴細胞的活單細胞懸浮液
? 新鮮細胞培養(yǎng)級二甲基亞砜（DMSO;如Sigma D2650）
? 無菌杜爾貝科磷酸鹽緩沖鹽水（1× DPBS）
? 細胞培養(yǎng)基，如10%胎牛血清（FBS）
? 無菌聚丙烯 15 mL 或 50 mL 錐形管
? 微量離心管或2-mL冷凍管
? 用于免疫表型或功能分析的熒光抗體（可選）
所需設(shè)備
? 配備藍色激光的細胞儀;例如，BD FACSCanto™ II、BD LSRFortessa™、BD LSR™ II 流式細胞儀或 BD Accuri™ C6
? 離心機
? 37°C CO2 培養(yǎng)箱和 37oC 水浴
存儲
到達后，用干燥劑儲存染料粉末，并在≤-20°C下避光，直到使用。用DMSO重構(gòu)后，將帶有干燥劑的儲備溶液儲存在≤-20°C的小等分試樣中。如果按照指示儲存，儲備溶液穩(wěn)定3個月。
程序
CFSE的 吸收率為490 nm， 發(fā)射波長為520 nm。在用該試劑染色前，請確認您的流式細胞儀能夠激發(fā)熒光染料并區(qū)分發(fā)出的熒光。
DMSO中CFSE染料溶液的制備
1. 通過將90μL DMSO加入一小瓶CFSE來制備10 mM CFSE染料儲備溶液。通過渦旋 混合。
2. 使用適當標記的微量離心管或2-mL冷凍管制備一次性等分試樣CFSE儲備溶液（用戶定義的體積）。
3. 用干燥劑在≤-20°C下冷凍所有等分試樣，避光。
細胞的 CFSE 標記
該程序已針對標記細胞濃度為10-30×10 ^ 6個細胞/ mL的小鼠和人淋巴細胞進行了優(yōu)化。檢測條件可能需要針對其他細胞類型或細胞密度進行優(yōu)化。
1. 解凍CFSE的10 mM儲備溶液，如果先前冷凍。
2. 將細胞轉(zhuǎn)移到15或50 mL聚丙烯離心管中。
3.在1× DPBS中洗滌細胞，以除去任何殘留的血清蛋白。
4. 重復(fù)步驟 3。
5.將細胞以10-30×10 ^ 6個細胞/ mL的濃度在1× DPBS中將細胞 重懸到單個細胞懸浮液中。
a. 注意：避免在含疊氮化物、血清或蛋白質(zhì)的緩沖液中染色，因為這些部分與游離染料結(jié)合，并可能干擾細胞的染色。
6. 將原液CFSE加入單細胞懸浮液中，以達到1-10μM的最終濃度。如有必要，在加入單細胞懸浮液之前，可以用DMSO進一步稀釋儲備溶液。立即渦旋。
7.將染細胞懸浮液在37°C水浴中孵育10-15分鐘。
8.離心將9×原體積為1× DPBS的細胞和沉淀細胞中加入。
9.傾析上清液并輕輕混合以破壞細胞沉淀。
10. 加入10 mL含有10%FBS的完全培養(yǎng)基，并重復(fù)離心步驟。
11.傾析上清液并輕輕混合以破壞細胞沉淀。
12.將細胞重懸于完整培養(yǎng)基中，然后通過流式細胞術(shù)進行細胞培養(yǎng)或分析。
筆記：
通過將標記的細胞與未標記的對照細胞進行比較來確認細胞標記的亮度。
2. BD Horizon™ CFSE可用于需要用甲醛固定和用甲醇和去垢劑透化等用于BD磷流™染色（例如，類別558050，BD Phosflow™ Perm緩沖液III），細胞內(nèi)細胞因子染色（例如，554714號，BD細胞固定/全™甲基化試劑盒）或轉(zhuǎn)錄因子染色（例如， 貓。No. 562574/562725， BD Pharmingen™ Transcription Factor Buffer Set）。
3. 通過增加初始 CFSE 染料上樣濃度，可實現(xiàn)更高的初始染色強度。然而，與其他含有痕化染料的琥珀酰亞胺酯一樣，較高的負載濃度可能導(dǎo)致細胞毒性增加或細胞死亡。
