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| 產(chǎn)地 | 美國 |
| 保存條件 | |
| 品牌 | BD |
| 貨號 | 556463 |
| 用途 | 細胞培養(yǎng) |
| 組織來源 | |
| 細胞形態(tài) | |
| 是否是腫瘤細胞 | |
| CAS編號 | |
| 保質(zhì)期 | |
| 器官來源 | |
| 免疫類型 | |
| 品系 | |
| 生長狀態(tài) | |
| 物種來源 | |
| 包裝規(guī)格 | 2mL/支 |
| 純度 | % |
| 是否進口 | 是 |
PI染色液可用于細胞凋亡檢測，也可用于普通的細胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色，染色后可用熒光顯微鏡檢測或流式細胞儀檢測。Propidium Iodide是一種DNA 結(jié)合性染料，其激發(fā)和發(fā)射波長分別為488nm和630nm，產(chǎn)生紅色熒光，但無膜通透性，不能透過活細胞膜，只能染死細胞。因此，在熒光顯微鏡下觀察，正常細胞不能著色，早期凋亡細胞呈微弱紅光，晚期凋亡細胞紅光加強，壞死細胞呈強紅色熒光。也可采用流式細胞儀利用細胞形態(tài)上的改變影響它們的光散射特性改變進行分析，還可與RNase A結(jié)合進行細胞周期分析。
儲存條件：4℃避光保存。長期保存-20℃避光保存。
有效期：六個月。
注意事項：
●本試劑盒僅供科學研究使用，不可用于診斷或 。
● 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。
● Propidium iodide是光敏物質(zhì)，請注意避光。
● 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。
● 樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結(jié)果。
● 使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并 清除殘留清潔劑。
● 避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
使用方法：
使用注意事項：
●本染色液用于細胞染色分析，也可用于石蠟切片、冰凍切片、細胞涂片的檢測。石蠟切片用常規(guī)方法脫蠟、分化、冰凍切片用冰丙酮固定后檢測。以下以培養(yǎng)細胞的熒光顯微鏡檢測為例，細胞染色可用預(yù)冷的70%的乙醇固定，4℃，1-2小時，也可不固定，其他方法請參閱相關(guān)資料。
● 細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。
●染色后請盡快檢測。
●染色時間根據(jù)不同樣本的實際染色結(jié)果做相應(yīng)調(diào)整。
● PI有毒，操作時要戴上手套。
● 流式檢測細胞凋亡時，其DNA可染性降低被認為是凋亡細胞的標志之一，但這種DNA可染性降低也可能是因為DNA含量的降低，或者是因為DNA 結(jié)構(gòu)的改變使其與染料結(jié)合的能力發(fā)生改變所致。在分析結(jié)果時應(yīng)該注意。
熒光顯微鏡觀察
1．收集細胞，PBS洗滌細胞一次，2000rpm離心5分鐘，用PBS重懸細胞，調(diào)整細胞濃度約為106個/ml；
2．取100μl細胞懸液，加入2-10μl PI染液，輕輕混勻；
3．4℃避光放置5min后，滴加于載玻片上，加蓋玻片；
4．熒光顯微鏡檢測。
流式檢測：
1．收集細胞，PBS洗滌細胞一次，2000rpm離心5分鐘，用PBS重懸細胞，調(diào)整細胞濃度約為106個/ml；
2．500μl細胞懸液中加入5μl PI染液；
3．4℃避光放置30min；
4．流式細胞儀檢測。
結(jié)果分析：
置于熒光顯微鏡下用488nm 激發(fā)光觀察結(jié)果：正常細胞不能著色，早期凋亡細胞呈微弱紅光，晚期凋亡細胞紅光加強，壞死細胞呈強紅色熒光。
流式檢測用氬離子激發(fā)熒光，激光光波波長為 488nm，發(fā)射光波波長大于630nm，產(chǎn)生紅色熒光分析PI熒光強度的直方圖也可分析前散射光對側(cè)散射光的散點圖。在前散射光對側(cè)散射光的散點圖或地形圖上，凋亡細胞與正常細胞相比，前散射光降低，而側(cè)散射光可高可低，與細胞的類型有關(guān)；在分析PI熒光的直方圖時，先用門技術(shù)排除成雙或聚集的細胞以及發(fā)微弱熒光的細胞碎片，在PI熒光的直方圖上，凋亡細胞在G1/G0 期前出現(xiàn)一亞二倍體峰。如以G1/G0 期所在位置的熒光強度為1.0，則一個典型的凋亡細胞樣本其亞二倍體峰的熒光強度為0.45，可用雞和鮭魚的紅細胞的PI熒光強度做參照標準，兩者分別為0.35和0.7，可以確保在兩者之間的不是細胞碎片而是完整的細胞。
